中药的理化鉴别
理化鉴别是指用物理或化学方法对中药材及其制剂中所含的有效成分、主要成分或特征成分进行定性和定量分析,从而鉴别真伪、评价质量。
当化学成分不清楚,或因次要成分的干扰而无法进行主成分分析时,可选择一些特殊的色谱和光谱峰进行鉴别和识别。
常用的理化鉴别方法主要有定性反应法、色谱法和光谱法。
(1)颜色或沉淀反应
由于结构或官能团的不同,各种成分常与某些特定的试剂发生反应,产生不同的颜色或沉淀。例如,生物碱和碘化铋钾形成橙色沉淀;蒽醌与碱液反应生成橙色、红色和蓝色;黄酮类化合物与盐酸镁粉的反应,胡芦巴香精与内酯铁氧肟酸的反应,
皂苷的利贝曼-伯查反应、强心苷的K-K反应、酚类的氯化铁反应、鞣质的明胶沉淀反应、氨基酸的茚三酮反应、糖类的苯酚-硫酸反应等。
(2)色谱法
已成为药材和成药鉴定不可或缺的常规有效方法,特别是对于成分复杂的中药和天然药物,具有分离、分析和鉴定的双重优势。
常用的色谱鉴别方法有薄层色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法、纸色谱法、凝胶电泳、毛细管电泳等技术。薄层色谱法:是中药鉴定中最常用、简单、直观、经济的色谱法。样品铺开后,
可以通过斑点的荧光或显色反应直接进行鉴别比较,也可以通过扫描进行定性定量分析,适用于几乎所有动植物药材的鉴别。最常用的方法是硅胶薄层色谱法。
气相色谱法:适用于挥发性成分或衍生化后可气化成分的定性定量分析,具有灵敏度高、分离效率高的优点,特别是气相色谱-质谱-计算机联用技术的发展。为了鉴别富含挥发油的药材,
气相色谱法已经成为优选的方法。非挥发性组分也可以通过热解气相色谱或快速气相色谱来鉴定。高效液相色谱法:具有柱效高、分离度好、重现性好的特点。配合不同类型的检测器,可以分析多种中药成分。
特别适用于分析具有紫外吸收的化合物;一般用于含量测定,但也可以根据特征色谱峰和指纹图谱进行定性分析,特别是三维高效液相色谱的发展,使定性分析变得方便。纸层析:是一种分配层析,
它可用于分析水溶性成分,如氨基酸和糖。凝胶电泳:适用于多肽、核酸、多糖等大分子化合物的分析鉴定。特别是随着分子生物学的发展,DNA指纹分析被应用于植物和动物的鉴定。与次级代谢物的分析相比,
更能反映物种内在的遗传变异规律。毛细管电泳:近年来发展起来的一种新的分析技术,结合了高效液相色谱和电泳技术的优点,使中药成分的分析范围更广、更灵敏,因为它从根本上解决了高效液相色谱分析中最令人头痛的柱效问题。
(3)光谱方法
根据中药成分结构的不同,会有特征吸收峰。常用方法包括可见-紫外分光光度法、红外分光光度法、串联质谱法、核磁共振法和线性调制分析法。可见-紫外分光光度法:一般用于总提取物或部分提取物中某些成分的含量分析。
混合物中的单一组分也可以通过导数光谱法确定,或者通过指纹图谱进行定性分析。红外分光光度法:主要用于指纹分析鉴定。串联质谱(MS/MS):可直接用于粉末药材(中成药)的分析鉴定。
这是一种新的质谱技术。核磁共振波谱(NMR):可用于特定结构类型化合物的定性和定量分析,如药用植物中吡咯里西啶生物碱的核磁共振分析。X射线分析:主要适用于矿物药材的分析鉴定。
也可用于粉末药物的直接分析。